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细胞学染液的配制

时间:2010-05-16  阅读:15957次

1、苏木素
(1) Harris苏木素(退行性染色):
      配方:
 苏木素     1 g       无水乙醇    10 ml
 蒸馏水  200 ml       钾明矾    20 g              
 HgO      0.5 g   

      先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把硫酸铝钾(起媒染作用。媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸)放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天100张片的量,可使用半个月左右。
  
(2)Gill改良苏木素液(进行性染色) :
     苏木精       2  g            无水酒精     250 ml
      硫酸铝     17.6 g            蒸馏水       750 ml
      碘酸钠     0.2-0.3 g         冰醋酸       20  ml
    先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化进行性苏木素液,染色一般不需要分化,不会产生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能与碘酸钠的失效有关,可适当多加一点。


2、桔黄G6: 桔黄G 0.5克溶于5 ml 蒸馏水中,加入纯酒精100 ml,然后加磷钨酸0.015克,用时过滤。


3、EA36 :是三种染料配合而成。(不可多配,不能久置)
淡绿SF :2.5克加入5 ml 蒸馏水中,加纯酒精500 ml         
俾士麦棕: 0.5克加入5 ml 蒸馏水中,加纯酒精100 ml    
醇溶性依红:2.5克加入95%酒精500 ml
        
配方:
0.5%淡绿液:        45 ml
0.5%俾士麦棕液:    10 ml
0.5%醇溶性依红液:  45 ml
混合后加磷钨酸0.2克,再加碳酸锂饱和溶液数滴,个人认为pH调至6.5左右比较好。

    此法的关键在于亮绿( 淡黄),必须购买Light Green SF Yellowish (如SIGMA L5382),否则使用相类似的产品往往不容易着色或根本不着色。

4、EA50(配方一): 3%亮绿水溶液5毫升,纯甲醇125毫升, 20%伊红Y 水溶液10毫升,冰醋酸10毫升,磷钨酸1克,95%酒精350毫升。混合后加碳酸锂饱和溶液,(用pH计测)调pH至6.5左右。

 

5、EA50(配方二,推荐):
0.5%淡绿醇溶液:            225 ml
0.5%俾士麦棕液:     100 ml
0.5%醇溶性依红液:  450 ml
95%酒精                     225 ml
磷钨酸                        6克
混合后加碳酸锂饱和溶液,(用pH计测)调pH至6.5左右。





参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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