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常用HE试剂配制

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:30570次

一、 苏木素
(1) Harris苏木素(退行性染色):
 配方:
 苏木素  1 g       
无水乙醇    10 ml
 蒸馏水 200 ml    硫酸铝钾 20g         
HgO  0.5 g
    先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把硫酸铝钾(起媒染作用。媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸)放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天100张片的量,可使用半个月左右。
  
(2)Gill改良苏木素液(进行性染色):
      苏木精           2  g         无水酒精     250   ml
      硫酸铝        17.6  g         蒸馏水       750   ml
      碘酸钠     0.2-0.3  g         冰醋酸      15-25 ml
    先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化进行性苏木素液,不会产生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能是碘酸钠量的原因,可根据气温变化多加一点(气温在30度时,一般碘酸钠量为0.25 g,气温每降低5度,可增加0.01 g,反之可减少)。有人用硫酸铝钾代替硫酸铝,也可以,着色能力略强于硫酸铝,染液会产生沉淀和结晶。也可以采用加温溶解配制,可促进氧化,增强着色能力。

    Gill改良苏木素液色浅的原因与其苏木精、硫酸铝的量少也有关,因此我们对配方略作改良:
     苏木精           4  g         无水酒精     250   ml
      硫酸铝         36g         蒸馏水       750   ml
      碘酸钠         0.4 g         冰醋酸       15-25 ml
      
    此配方需要分化。

二、伊红
(1)伊红(水溶性)
    配方:
    伊红 (水溶性)         2 .5 -5g   
    蒸馏水                  500 ml
    将水溶性伊红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%酒精1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰醋酸(促染剂:只能增加染料的着色能力,但不参与染色反应的物质)
    此方法具有染色时间快,颜色鲜艳,不容易褪色,使用寿命长等特点。

(2) 伊红(醇溶性)
      配方:
      伊红 (醇溶性)     2.5-5 g
      95%酒精                  1000 ml
   加冰醋酸10滴(0.5ml),冰醋酸过多,可导致染浆时细胞核酸化。
    伊红的染色速度,与其pH值相关,pH越酸,染色速度越快,pH在3.5左右,染色时间只需2-3秒,当pH在6.5左右,染色时间要2-3分钟。由于胞浆的等电点pH为4.7-5.0,故伊红pH以4.5左右为适。
    我们在日常工作中1000 ml95%酒精中加0.8 g醇溶性伊红,机器染色1000张切片左右(每天)更换,结果更稳定。

三、 固定液:
(1)12% 中性福尔马林液  (pH7.0)
 甲醛                       120 ml
 NaH2PO4•H2O            4 g   
 Na2HPO4                   13 g  
 蒸馏水                      880 ml

(2)12% 酸性福尔马林液(PH 2.5-3.0)
甲醛                   120 ml
水                       830 ml
冰醋酸               30-50 ml

(3)12% 福尔马林液
甲醛                 120 ml
水                    880 ml

(4) Bouin 固定液
饱和苦味酸         85  ml
甲醛                    10  ml
冰醋酸                  5  ml

四、 脱钙液:
(1)10 % 盐酸甲醛脱钙液
      浓盐酸    10 ml
      甲醛                 10 ml
       水                    80 ml
(2)30 % 盐酸脱钙液
      浓盐酸   30 ml
      水                70 ml

(3)10 % 硝酸脱钙液
      浓硝酸      10 ml
      水                    90 ml
(4) Bouin 固定液
饱和苦味酸              85  ml
甲醛                         10  ml
冰醋酸                      5  ml
在众多脱钙液中,以硝酸为最强,在脱钙过程中,要经常用大头针对骨组织进行针刺,如果能容易刺进了,就说明脱钙完成了,就应该立即中止脱钙。较硬的骨组织应该用10 % 硝酸脱钙,一般4-24小时。一般钙化或少量骨组织,可用30 % 盐酸脱钙,一般12-36小时。骨髓组织可用10 % 盐酸脱钙,一般12-24小时。
   脱钙结果后,必需流水冲洗4-8小时,才能再进行固定、脱水。

五、1% 盐酸酒精分化液:
     浓盐酸                1 ml
     75%酒精          99 ml

六、清洗液:
   30%盐酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小时,取出后充分水洗。此法可用于盖玻片或载玻片处理。

七、当量盐酸:

配制1N的HCL 1000 ml ,需浓HCL多少ml ?
    
          M x 分子量               1 x 36.46
  =  ————————————  = —————————— =  82 .8 ml
        化合价x 比重 x 百分浓度     1 x 1.19 x 37%

 




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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