细菌
Gram碱性复红结晶紫法
试剂配制：
(1)  苯胺油石炭酸复红液：
碱性品红0.5g，苯胺油1ml，石炭酸1g，30%酒精70ml。碱性品红溶于70ml酒精中，隔水加热至90℃，冷却后加入石炭酸和苯胺油。
（2）碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml
（3）结晶紫染液：结晶紫 2g，95%酒精20ml，草酸胺1g，蒸馏水80ml。
结晶紫溶于酒精，，草酸胺溶于蒸馏水。二液混合，此液置冰箱可保存数月。
操作方法：
1、 组织固定于10%甲醛液，按常规脱水包埋。
2、 切片脱蜡至水。
3、 苯胺油石炭酸复红液5分钟。
4、 自来水冲洗，蒸馏水洗。
5、 4%甲醛1分钟，蒸馏水洗2次。
6、 苦味酸饱和水溶液处理2分钟。
7、 经过95%酒精速洗后，放入自来水中立即变红色。
8、 自来水冲洗，蒸馏水洗。
9、 碘液作用2分钟，自来水洗，用滤纸直接吸干。
10、二甲苯苯胺油等份混合，进行分化苯。
11、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果：革兰氏阳性细菌呈蓝色，阴性细菌呈红色，细胞核呈红色。

                                     抗酸杆菌
苯酚碱性品红法：
   碱性品红酒精液：碱性品红 5克   无水酒精 100毫升
   5%苯酚水溶液: 苯酚 5毫升(略加温,使其溶解) 蒸馏水 95毫升
   苯酚碱性品红液: 碱性品红酒精液 1毫升
   5%苯酚水溶液 9毫升
染色步骤:
1. 切片二甲苯脱蜡,95%酒精速洗
2. 蒸馏水洗
3. 苯酚碱性品红液染15～30分钟
4. 蒸馏水洗
5. 2 %硫酸水溶液分化至适当为止
6. 水洗
7. 烘干,透明,封固
结果:抗酸杆菌(结核杆菌和麻风杆菌)呈红色。

　　　　　　　           　真　菌
（一）高碘酸法复红法
亮绿液：   亮绿 0.2g        蒸馏水 100 ml       冰醋酸 0.2 ml
Schiff试剂配制:
碱性品红 1 g ，活性炭 2 g ，当量盐酸 20 ml ，偏重亚硫酸钠 1.5 g
1. 碱性品红1g，放入200毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤，滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
4. 加活性2 g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃冰箱保
   存。 

染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水。
2. 0.5%～1%过碘酸水溶液5～10分钟。
3. 蒸馏水洗多次。
4. Schiff液10～15分钟。
5. 0.5%偏重亚硫酸钠液洗2次,每次1分钟。
6. 流水冲洗10分钟。
7. 亮绿液复染数秒钟。
8. 水洗，酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
结果：真菌红色，其他组织绿色。

（二）六胺银染色法
六胺银液配制：
       3%六次甲基四胺水溶液  5 ml
       2.5%硝酸银水溶液      0.5 ml
摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5～2 ml加蒸馏水至30～40 ml
步骤：
1、 切片脱蜡至水，蒸馏水洗
2、 0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗
3、 六胺银液60℃，1～2小时，（或六胺银液80～90℃，半小时左右，）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）
4、 0.2% 氯化金调色数秒
5、 丽春红淡染
6、 水速洗
7、 烘干，透明，封片。
结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。

 　　　             幽门弯曲菌（HP）
（一）HP（美蓝法）
美蓝液: 美蓝(亚甲基蓝)1. 0 g ， 硼酸 0 . 5 g ，加蒸馏水至 100 ml
  步骤：
  1  切片脱蜡至水
  2  入美蓝液中1分钟
  3  水洗后烤箱烘干封固(不宜酒精脱水)
结果:  幽门弯曲菌深蓝色
优点:  试剂配制容易，染色方法简单
应用：帮助慢性胃炎、消化道溃疡的诊断及治疗。

（二）、HP（硝酸银法）
试剂配制：
（一） 醋酸缓冲贮备液，PH3.6
0.2N醋酸缓冲液，PH3.6             10 ml
蒸馏水                            240 ml
以下各液均用此液配制
（二） 1 %硝酸银液
硝酸银                            1 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6             100 ml 
（三） 2 %硝酸银液
硝酸银                            0.2 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6              10 ml
（四） 5 %明胶液
明胶                             5 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6             100 ml
先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅拌。
（五） 3 %对苯二酚液
对苯二酚                         0.3 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6             10 ml
（六） 明胶对苯二酚液
3 %对苯二酚液                    1 ml
5 %明胶液                       15 ml
（七） 显影液
明胶对苯二酚液                  16 ml
2 %硝酸银液                     3 ml
  在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用。
操作方法：
1、组织脱蜡至蒸馏水
2、醋酸缓冲贮备液洗2次
3、入1 %硝酸银液中，56℃，1小时
4、切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止。
5、倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟
6、水洗
7、 脱水，透明，封固。
8、 结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。
注意：载玻片不能用粘贴剂或用硅化玻片

                     新型隐球菌
（一）、爱先蓝法（根据Steedman，1950；Lison，1954）
试剂配制：
（1）爱先蓝水溶液（pH2.5）：爱先蓝（alcian blue 8GX）1g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml，麝香草酚50mg（可不加）
（2）核固红液：核固红（nuckear fast red）0.1g，蒸馏水100ml，硫酸铝5g，麝香草酚50mg（可不加）
先把硫酸铝溶于蒸馏水，然后加入核固红，稍加温溶解，冷却后过滤，最后加入麝香草酚（可不加）。
操作方法：
1、 组织固定于10%甲醛液，按常规脱水包埋。
2、 切片脱蜡至水。
3、 爱先蓝染液染10-20分钟。
4、 水洗。
5、 核固红液复染5-10分钟。
6、 水洗。
7、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：新型隐球菌的荚膜呈蓝色，胞核红色。

（二）粘液胭脂红法（根据Southgate改良Mayer，1927）
试剂配制：
Southgate粘液胭脂红贮备液：胭脂红（carmine）1g，无水酒精50ml，蒸馏水50ml，氢氧化铝，0.5g
用烧杯放入无水酒精和蒸馏水，使其混合成50%酒精，依次加入胭脂红等，用玻璃棒搅拌混和，于水浴中煮沸3分钟，并不断搅动。

待冷至室温后过滤，并用50%酒精加至100毫升。临用前取贮备液1份，蒸馏水4份混合使用。也可直接用贮备液来染色。
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 用苏木素染核。
3、 自来水洗。
4、 1%盐酸酒精分化。
5、 流水冲洗10分钟。
6、 Southgate粘液胭脂红稀释液染20-30分钟。
7、 水洗去多余染液。
8、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：新型隐球的荚膜染成红色，胞核蓝色。

                                乙型肝炎表面抗原
（一）地衣红法（根据（Shikata，1974）
试剂配制：
（1） 酸化高锰酸钾水溶液：
甲液：0.5%高锰酸钾水溶液高锰酸钾0.5g，蒸馏水加至100ml
乙液：0.5%硫酸水溶液：纯硫酸0.5ml，蒸馏水99.5ml
甲、乙两液分瓶装，临用前等份混合。
（2）2%草酸水溶液：草酸2g，蒸馏水加至100ml
（3）酸化地衣红酒精液：地衣红（orcein）1g，70%酒精100ml，盐酸1ml
先将浓盐酸倾入70%酒精中，然后加入地衣红，混合后用玻棒搅动，使其尽量溶解，其pH值相当于1.0，放置1-2天后即可使用。
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟。
3、 水洗。
4、 2%草酸液漂白2-3分钟，至切片无色为止。
5、 流水冲洗2-3分钟。
6、 70%酒精稍洗。
7、 置入酸化地衣红酒精液内染3-5小时。
8、 70%酒精浸洗二次，每次约10-30秒钟，至无染液脱出为止。
9、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：肝细胞内的乙型肝炎表面抗原染成棕红至深棕色，呈微细颗粒状或无质状。弹性纤维也染为深棕色，其余底色为较浅淡的灰

棕色。肝细胞核不着色。

（二）、醛品红法（根据Gomori，1950）
试剂配制：
（1） 酸化高锰酸钾水溶液：
甲液：0.5%高锰酸钾水溶液高锰酸钾0.5g，蒸馏水加至100ml
乙液：0.5%硫酸水溶液：纯硫酸0.5ml，蒸馏水99.5ml
甲、乙两液分瓶装，临用前等份混合。
（2）2%草酸水溶液：草酸2g，蒸馏水加至100ml
（3）醛品红染液：碱性品红0.5g，70%酒精95ml，浓盐酸1ml，三聚乙醛1ml
     将碱性品红溶解于70%酒精，然后加浓盐酸和三聚乙醛1ml，慢慢摇动使之均匀混合，24小时后可以使用。
操作方法：
1、 切片脱蜡至水。
2、 酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟。
3、 水洗。
4、 2%草酸漂2-3分钟，至切片无色为止。
5、 流水冲洗2-3分钟。
6、 70%酒精稍洗。
7、 置入醛品红液内梁5-10分钟。
8、 70%酒精浸洗二次，每次约10-30秒钟。
9、 、常规脱水透明，中性树胶封固。
结果： 肝细胞的乙型炎表面抗原被染为紫至深紫色，弹力纤维深紫色。

（三）、维多利亚蓝法（1981）
试剂配制：
（1） 维多利亚蓝染液：维多利亚蓝（victoria blue）2g，糊精（dextrin）0.5g，间苯二酚（resorcin）4g，蒸馏水200ml
取一只500ml烧杯，加入蒸馏水，再把维多利亚蓝、糊精和间苯二酚加入溶解，在慢火中煮沸，然后再用另一只烧杯煮沸30%三氯化

铁液25毫升，慢慢倒入维多利亚蓝混合液中，继续煮沸3分钟，不断搅拌呈胶体物。冷却后过滤，将沉渣和滤纸放在60℃烧箱内烤干

。取另一只烧杯盛70%酒精400毫升溶解沉渣，然后加入冰醋酸4毫升和苯酚6克作防腐剂，放置一周成熟后使用。
（2） 酸化高锰酸钾水溶液：
甲液：0.5%高锰酸钾水溶液高锰酸钾0.5g，蒸馏水加至100ml
乙液：0.5%硫酸水溶液：纯硫酸0.5ml，蒸馏水99.5ml
甲、乙两液分瓶装，临用前等份混合。
（3）2%草酸水溶液：草酸2g，蒸馏水加至100ml
（4）核固红染液：核固红0.1g，5%硫酸铝水溶液100ml
       将核固红溶于硫酸铝水溶液中，加温煮沸后冷却，过滤备用。
操作方法：
1、 切片蜡至水。
2、 酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟。
3、 水洗。
4、 2%草酸液漂白2分钟。
5、 流水冲洗5分钟。
6、 70%酒精稍洗。
7、 置入维多利亚蓝液内染24-48小时。
8、 70%酒精浸洗二次，每次约1-3分钟，至切片不有染液脱出为止。
9、 流水稍冲洗。
10、 核固红液染核5-10分钟。
11、 水洗。
12、 常规脱水透明，中性树胶封固。
结果：肝细胞内的乙型肝炎表面抗原呈蓝色，弹力纤维和胶原纤维也着染蓝色，胞核红色。