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病理性沉着物

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:19294次

        纤维素
   一、马休黄-酸性品红-苯胺蓝法(改良Lendrum,1962)
试剂配制:
(1)青石蓝染液:酸铁铵5g,馏水100ml,青石蓝(celestine blue B)0.5g,甘油14ml,香草酚)50mg
用三角烧瓶盛蒸馏水,加入硫酸铁铵,不断摇动使其完全溶解。再加入天青石蓝,煮沸2-3分钟,在煮沸时用玻璃棒轻轻不断搅动。冷却后过滤,最后加入纯甘油和麝香草酚
(2)Mayer氏苏木素:苏木素0.1g,蒸馏水100ml,碘酸钠20mg,硫酸铝铵5g,柠檬酸0.1g,水合氯醛5g
苏木素在蒸馏水中完全溶解(必要时间稍加温),再加碘酸钠及硫酸铝铵,不断和玻璃棒搅动使硫酸铝铵完全溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,过滤后即可使用。
(3) 马休黄染液:马休黄(Martius yellow)0.5g,95%酒精100ml,磷钨酸2g
先把马休黄溶于95%酒精,再加入磷钨酸。
(4)酸性品红液:酸性品红(acid fuchsin)1g,蒸馏水98ml,冰醋酸2ml(5)苯胺蓝染液:苯胺蓝(aniline blue)0.5g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml(6)1%磷钨酸水溶液:磷钨酸1g,蒸馏水100ml
(7)1%醋酸水溶液:冰醋酸1ml,蒸馏水99ml
操作方式:
1、 组织固定于甲醛氯化汞液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。
2、切片脱蜡至水,并进行除汞处理:
(1)切片于0.5%碘酒精液作用10分钟。
(2)水洗。
(3)5%硫代硫酸钠脱碘5分钟。
(4)流水冲洗10分钟。
3、天青石蓝液染2-3分钟。
4、水洗。
5、Mayer氏苏木素染2-3分钟。
6、水洗。
7、1%盐酸酒精分化。
8、流水冲洗10分钟。
9、95%酒精稍洗。
10、 马休黄液染2分钟。
11、 蒸馏水稍洗。
12、 酸性品红液染10分钟。
13、 蒸馏水稍洗。
14、1%磷钨酸水溶液处理5分钟。
15、蒸馏水稍洗。
16、苯胺蓝液染5-10分钟。
17、1%醋酸水溶液洗去多余染液并分化。
18、不水洗,直接用滤纸吸去周围水份。
19、95%酒精急速脱水,再经无水酒精。
20、二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:纤维素鲜红色,肌纤维红色,胞核蓝褐色,胶原纤维蓝色,红细胞黄色,陈旧的纤维素紫蓝色。

二、苯酚结晶紫法(Weigert法)
试剂配制:
(1)碳酸锂胭脂红液:胭脂红(carmine)2g,碳酸锂饱和水溶液(约1.2%)100ml,麝香草酚100mg
把胭脂红溶于碳酸锂饱和水溶液,慢火煮沸10分钟,冷却后加入麝香草酚,用前过滤。
(2)5%苯酚水溶液:苯酚 5ml,蒸馏水95ml(可稍加温使其溶解)
(3)结晶紫酒精液:结晶紫(crystal violet)5g,无水酒精100ml,配后用小口砂塞瓶密封存放。
(4)苯酚结晶紫染液:结晶紫酒精液1份,5%苯酚水溶液9份
(5)Weigert氏碘液:碘片(iodine)1g,碘化钾2g,蒸馏水100ml
(6)苯胺二甲苯液:1份苯胺(aniline),二甲苯3份
操作方法:
1、 切片脱蜡至水。
2、 碳酸锂胭脂红液滴染5-10分钟。
3、 直接滴入1%盐酸酒精半分钟。
4、 流水冲洗5分钟。
5、 用苯酚结晶紫液滴染5分钟。
6、 倾去染液,用滤纸稍吸干切片周围染液。
7、 Weigert氏碘处理1-2分钟。
8、 水洗后用虎纸彻底吸干水份。
9、 苯胺二甲苯分化,并摇动切片使分化均匀。必要时要更换新的分化液,至无颜色脱出,立即倾去苯胺二甲来。
10、 滴入新的二甲苯,以除去苯胺,然后在镜下观察。如分化不足,可再滴上苯胺二甲继续分化,至切片清晰为止。
11、 用二甲苯反复滴洗数次,彻底把苯胺除去。
12、 中性树胶封固。
结果:纤维素呈蓝紫色,胞核红色。革兰氏阳性细菌也呈蓝紫色。

 

          淀粉样蛋白
一、甲基紫法( Jurgens,1875)
试剂配制:
(1)1%甲基紫水溶液:甲基紫(methyl violet)1g,蒸馏水加至100ml
(2)1%蜡酸水溶液:冰醋酸1ml,蒸馏水99ml
操作方法:
1、 组织固定于10%甲醛液,按常规脱水包埋。(用冰冻切片效果更佳)。
2、 常规脱蜡至水。
3、1%甲基紫水溶液染3-5分钟。
4、水洗,在镜下观察。
5、1%蜡酸水溶液分化,直至见淀粉样蛋白呈紫红色或红色,胞核呈蓝紫色。6、流水稍冲洗。
用阿拉伯树胶封片。或把切片自然凉干后,用中性树胶封固。
结果:淀粉样蛋白呈紫红色至红色,胞核、胞质、结缔组织呈蓝色至深浅不同的紫色。
注意事项:1、如无甲基紫,也可用结晶紫代替,同样可获得异色反应。
2、切片不能用酒精脱水,因为此染料溶于酒精而立即脱色。
3、切片也不宜用甘油明胶封盖。

二、甲醇刚果红法(改良的Highman)
(1)甲醇刚果红液:刚果红(congo red)0.5g,甲醇80ml,甘油20ml
(2)碱性酒精分化液:氢氧化钾0.2g,80%酒精100ml
操作方法:
1. 切片脱蜡至水
2. 甲醇刚果红染液染10~20分钟
3. 用碱性乙醇分化液分化数秒
4. 水洗
5. 苏木素复染2分钟
6. 水洗
7. 脱水,透明,封固
结果:淀粉样物呈桔红色。

           尿素结晶
黄醇冰醋酸法(Oliver,1921)
试剂配制:
黄醇冰醋酸液:黄醇(xanthydrol)6g,无水酒精35ml,冰醋酸65ml
此液于临用前配制,先把黄醇溶于无水酒精和冰醋酸,待彻底溶解后即可用。操作方法:
1、尸解时切取不厚于2-3mm的脑组织小块,放入上述黄醇冰醋酸液内固定6小时。
3、 转入无水酒精补充固定和脱水2次,每次12-24小时。
3、再置入常规的无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片厚3-4μm。4、切片常规脱蜡至水。
5、明矾苏木素染核5分钟。
6、水洗。
7、1%盐酸酒精稍分化。
8、流水冲洗15分钟。
9、0.25%曙红液复染。
10、水洗。
11、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:尿素结晶呈棕黄色的放射状梅花形结晶,胞核蓝色,其他组织红色。注意事项:
1、黄醇冰醋酸液应于临用前配制,所取的组织块不可过厚。
2、尿素结晶极易溶解于水,不能用一般的水溶液固定剂固定,组织取好后必须立即放入黄醇冰醋酸液内固定。

       含铁血黄素
   普鲁士蓝反应:
试剂配制:
1. 2%亚铁氢化钾水溶液:   亚铁氢化钾 2 g ,蒸馏水 100 ml
2. 2%盐酸水溶液:   盐酸 2 ml,蒸馏水 98 ml
3. 0.1%沙红(safranine)溶液: 沙红 0.1 g, 蒸馏水 100 ml
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 取2%亚铁氢化钾水溶液和2%盐酸水溶液等份混合,滴在切片上,
   10~20分钟
3. 蒸馏水洗
4. 核复染
5. 水洗,脱水,透明,封固
结果:含铁血黄素呈蓝色。
应用:
    明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁血、出血;陈旧性出
血灶;肝硬化时慢性脾郁血的含铁结节;硬化性血管瘤;动
脉瘤性骨囊肿;绒毛色素性滑膜炎等。


       胆色素
三氯醋酸三氯化铁法(Hall)法:
试剂配制:
    Fouchet液:三氯醋酸25克溶于蒸馏水100毫升内,再将三氯化铁1克溶于10毫升蒸馏水内并加入到三氯醋酸里,混合,棕色瓶贮存。
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入Fouchet液中染30~60分钟
3. 蒸馏水洗2分钟
4. 在Van Gieson 液中复染1~2秒钟(淡染)
5. 水洗,60℃温箱中烘干,二甲苯透明,树胶封固。
结果:胆红素呈绿色,其他如复染呈红色和黄色。
应用:
胆色素主要的化学成份是胆红素和橙色血质。胆红素为黄褐色颗粒或同质性团块,它在肝细胞内形成。当胆道梗阻或胆红素代谢障碍时,胆红素被肝的星形细胞吞噬,如肝细胞发生变性,也常有胆色素沉着于其胞质内,毛细血管和小胆管腔内则形成胆汁“栓子”。阻塞性黄疸时,肾曲管上皮细胞有胆色素,并可在肾小管腔内形成胆汁管型,然而在溶血性黄疸则否。

         黑色素
(1) 漂白法:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入0.25%的高锰酸钾2-4小时
3. 蒸馏水洗
4. 入1%草酸处理1-2分钟
5. 水洗,核复染,脱水,透明,封固
结果:经处理后的切片如色素被脱色,说明是黑色素。
 
(2)LiLLie亚铁反应法:
试剂配制:
 硫酸亚铁溶液:硫酸亚铁(FeSO4•7H2O)2.5克溶于100ml蒸馏水中
 醋酸铁氰化钾溶液:铁氰化钾1克溶于1%醋酸溶液100ml中。
   染色步骤:
1. 切片脱蜡至蒸馏水
2. 入硫酸亚铁溶液60分钟
3. 蒸馏水洗多次
4. 入醋酸铁氰化钾溶液中处理30分钟
5. 1%醋酸水溶液中分化数秒
6. 水洗,可复染(Van Gieson或核固红)
7. 水洗, 60℃温箱中烘干,二甲苯透明,树胶封固。
结果:黑色素呈绿色。
注意:1. 醋酸铁氰化钾溶液和硫酸亚铁溶液需现配现用,不 能保存。
2.含铁血黄素有时也可呈绿色反应,所以,必要时应作铁染色。


       脂褐素
高碘酸-无色品红法( McManus,1948)
试剂配制:
(1)0.5%高碘酸水溶液:高碘酸0.5g,蒸馏水加至100ml
(2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
(3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、 切片脱蜡至水。
2、 0.5%高碘酸水溶液氧化5-8分钟。
3、 流水冲洗2分钟,再用蒸馏水洗一次。
4、 入无色品红液,于室温下置暗处使用10-20分钟。
5、 直接用0.5%偏重亚硫酸钠溶液滴洗2次,每次约1分钟。
6、 流水冲洗5分钟。
7、 苏木素浅染胞核3-5分钟。
8、 水洗。
9、 1%盐酸酒精分化1-2秒钟。
10、 流水冲洗10分钟。
11、 常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:脂褐素呈大小一致的红色颗粒,胞核蓝色。
注意事项:
苏木素染胞核不可过深,否则会遮盖脂褐素的红色。

         钙盐
一、硝酸银法( Von  Kossa,1901)
试剂配制:
(1)1%硝酸银液:硝酸银1g蒸馏水加至100ml
(2)2%硫代硫酸钠液:硫代硫酸钠2g,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、 切片脱蜡至水。
2、 蒸馏水洗。
3、 切片入1%硝酸银液置于强阳光处作用15-60分钟。
4、 蒸馏水洗3分钟。
5、 2%硫代硫酸钠液处理2分钟。
6、 流水冲洗5分钟。
7、 苏木素液染4-6分钟。
8、 水洗。
9、 1%盐酸酒精分化。
10、 流水冲洗10-15分钟。
11、 曙红液染2-3分钟,水洗。
12、 常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:钙盐呈褐黑至深黑色。
注意事项:
1、 钙盐的固定应使用中性缓冲甲醛液,不能使用酸性固定剂,因酸可溶解部分的钙盐。也不要采用10%甲醛钙固定液。
2、 硝酸银液的浓度由0.5-5%均可,采用1%的浓度,主要取决于暴光的亮度和时间,若暴露于强阳光下,需时15分钟已足,若暴露于紫外光灯下5-10分钟即可。

二、茜素红S法( McGee-Russell,1958)
试剂配制:
茜素红S(alizarin red S)2g,蒸馏水100ml
等茜素红S溶解于蒸馏水后,用10%氢氧化铵调整其pH至4.2(每100ml茜素红S液,约加10滴%氢氧化铵)。
操作方法:
1、 组织固定于10%缓冲中性甲醛液,按常规脱水包埋。
2、 切片脱蜡至水。
3、 茜素红S液滴染3-5分钟。
4、 用滤纸吸干周围染液。
5、 入丙仁酮洗数秒钟。
6、 丙酮二甲苯(1:1)洗数秒钟。
7、 二甲苯透明二次,中性树胶封固。
结果:钙盐沉淀处呈橘红色。
注意事项:
1、 显微镜下控制,如染色时间过长,可出现扩散现象。
2、 此方法适用于含量较少的钙盐,因其显示橘红色而易于观察。

                                         铜染色

罗丹明染色法

试剂配制:

1DMAB-罗丹明贮备液:对二甲氨基苄罗丹明饱和于无水乙醇中,贮存液4℃保存。

2DMAB-罗丹工作液(充分摇动):DMAB-罗丹明贮备液3ml,蒸馏水47ml

使用前现配现用。

染色步骤:

1)切片脱蜡至蒸馏水。

2)用DMAB-罗丹明液60℃染色3小时(1小时后显微镜下检查)。

3)蒸馏水冲洗。

4)对比染色(颜色要浅些)用苏木精染5秒。

5)盐酸乙醇分化。

6)流水冲洗5分钟。

7)脱水,透明,封固。

结果:铜沉积物-砖红色,核-蓝色,胆汁-绿色。

注意事项:

1)染色时加已知的阳性对照片和切片一起进行染色,确保获得正确的结果。

2)(步骤2)切片在60℃染色偶而出现一些染色背景。

3Depex封固剂中的二甲苯会过滤罗丹明的颜色,铜染色的颜色会显的模糊。

4)封固观察切片之前不能长时间停留在二甲苯中,二甲苯会降低罗丹明颜色的强度。

 

 




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

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