返回首页
设为首页
加入收藏夹
进入病理技术论坛
首页 技术精华 病理资讯 同行交流 技术会诊 点滴经验 常规切片 特殊染色 免疫组化 分子病理 细胞园地 细胞制片 电镜技术 病理图库
 首页 > 特染染色 > 正文
核酸

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:12912次

一、酸水解-无色品红法(Feulgen and Rossenbeck,1924)
试剂配制:
(1)0.2%亮绿水溶液:亮绿(light green)0.2g,蒸馏水加至100ml
(2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性炭2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
(3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml
(4)1N盐酸水溶液:浓盐酸(比重1.19)8.4ml,蒸馏水加至100ml
操作方法:
1、切片经二甲苯脱蜡至水。
2、室温中的1N盐酸稍洗。
3、放入预热至60℃的1N盐酸水解6-8分钟。
4、室温中的1N盐酸稍洗。
5、蒸馏水洗。
6、入无色品红液,于室温下置暗处作用30-60分钟。
7、不经水洗,直接滴入0.5%偏重亚硫酸钠水溶液洗二次,每次约1分钟。
8、流水洗5-10分钟。
9、0.2%亮绿水溶液复染数秒钟。
10、水洗。
11、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:脱氧核糖核酸呈紫红色,胞质和其他组织成份绿色。

(二)、甲基绿派洛宁法(Cook,1974)
试剂配制:
(1)2%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g,蒸馏水加至50ml
用三氯甲烷抽提:取2%甲基绿水溶液20ml,倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷20ml,充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞,慢慢地把有着色的三氯甲烷流去。如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液。
(2)5%派洛宁水溶液:派洛宁G(pyronine G)1g,蒸馏水加至20ml
(3)0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8):0.2M醋酸液41ml,0.2M醋酸钠液59ml
(4)甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提)5ml,5%派洛宁水溶液1ml,蒸馏水12ml,0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8)18ml
操作方法:
1、新鲜组织固定于Carnoy氏液(4℃)3-6小时,经95%酒精和无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。
2、切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水
3、置入甲基绿派洛宁染液于室温染30-60分钟。
4、取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。
5、用丙酮迅速分化。
6、转入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。
7、二甲苯透明2-3次。
8、中性树胶封固。
结果:存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色,胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
本栏目内容只供网友们学习研究用,不得用于商业行为。

【字体: 】【发表评论】【打印】【关闭
ico 论坛最新贴子
关于我们
  本站自1998年成立以来首次改版,从病理技术方面做全做深,新增了病理技术理论知识、病理资讯、病理图库及技术精英等功能。我们的宗旨是传播一种积极的思想,提供一些理论和实践的知识,为朋友们解决一点实际的问题,想您所想的,关心您关心的,希望病理技术网能成为全国病理工作者学习和交流的场所。
© Copyright 1998-2017 www.zhbljs.com,All Rights Reserved.
业务联系:DingWei(QQ:891232) 广告联系:CoastChen (QQ:37784) 技术支持:12900.COM