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糖类

时间:2007-12-23  作者:丁伟  阅读:14056次

      多糖类
高碘酸-无色品红-橙黄G法(Pearse,1953)

试剂配制:试剂配制:
(1)0.5%高碘酸水溶液:高碘酸0.5g,蒸馏水加至100ml
(2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性炭2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
(3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml
(5)Mayer氏苏木素液:苏木素0.1g,蒸馏水100ml,碘酸钠20mg,硫酸铝铵5g ,柠檬酸0.1g,水合氯醛5g
取一只200毫升洁净的烧杯盛蒸馏水,加入苏木素用玻棒搅拌使其完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠及硫酸铝铵,搅拌至溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,此时溶液呈紫红色,过滤于口砂塞瓶内,可保存多月。
(6)橙黄G染液,橙黄G2g,蒸馏水100ml,磷钨酸5g
先把磷钨酸溶于蒸馏水内,再加入橙黄G,摇动数分钟使其尽量溶解,静置一夜。用时吸取上清液。
操作方法:
1、切片脱蜡至水。
2、0.5%高碘酸水溶液氧化5-8分钟。
3、流水冲洗2分钟,再用蒸馏水洗。
4、入无色品红注于暗处并加盖作用10-20分钟。
5、0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次,每次约1分钟。
6、流水冲洗2分钟。
7、天青石蓝液染2-3分钟。
8、水洗。
9、Mayer氏苏木素液杂2-3分钟。
10、水洗。
11、1%盐酸酒精分化。
12、流水冲洗10分钟。
13、橙黄G液复染10-20秒。
14、水洗。
15、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:胞核呈蓝褐至深褐色,红细胞和肌纤维橙黄色。红至紫红色均为阳性反应。对PAS呈阳性反应的物质主要有糖原消化道、呼吸道和睡液腺的粘液,甲状腺胶质,脂褐素,垂体嗜碱细胞,软骨基质,基底膜,霉菌,纤维蛋白。胶原纤维以及一些糖脂类等也呈阳性反应。

         糖 原
一、 高碘酸-无色品红法( MaManus,1948)

试剂配制:试剂配制:
(1)0.5%高碘酸水溶液:高碘酸0.5g,蒸馏水加至100ml
(2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g
Schiff试剂配制:
1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
4. 加活性2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
(3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml
(4)Mayer氏苏木素液:苏木素0.1g,蒸馏水100ml,碘酸钠20mg,硫酸铝铵5g ,柠檬酸0.1g,水合氯醛5g
取一只200毫升洁净的烧杯盛蒸馏水,加入苏木素用玻棒搅拌使其完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠及硫酸铝铵,搅拌至溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,此时溶液呈紫红色,过滤于口砂塞瓶内,可保存多月。
(5)1%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g,蒸馏水加至100ml
用三氯甲烷抽提:取2%甲基绿水溶液20ml,倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷20ml,充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞,慢慢地把有着色的三氯甲烷流去。如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液。
(6)1%淀粉酶:淀粉酶(diastase)1g,蒸馏水加至100ml
(7)唾液:用烧坏收集唾液,加蒸馏水5-10倍,用玻棒搅拌数分钟,必要时可用双层纱布过滤。
操作方法:
1、取新鲜薄片组织,立即用Gendre氏固定液固定6-12小时或Garnoy氏液固定3-6小时,然后转入95%酒精,其间可更换两次新液。
2、第二天上午转入无水酒精按常规脱水透明,石蜡包埋,切片厚4-5μm。
3、取两张连续切片,分别作1和2记号,然后把2片脱蜡至水。
4、把2号切片置入预热至37℃的1%淀粉酶液,于37℃温箱内消化1小时,或用预热至37℃的唾液于37℃温箱消化30分钟。
5、取出切片水洗。
6、在消化过程中,把1片脱蜡至水。
7、在1、2两片同时滴入0.5%高碘酸水溶液氧化5-8分钟。
8、流水冲洗2分钟,再用蒸馏水洗一次。
9、入无色品红液于暗处并加盖作用10-20分钟。
10、用0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次,每次约1分钟。
11、流水冲洗2分钟。
12、1%甲基绿水溶液复染胞核3-5分钟。或用Mayer氏苏木素浅染胞核。
13、水洗。
14、常规脱水透明,中性树胶封固。
结果:胞质内阳性的亮红色颗粒为糖原,经消化后为阴性对照片。

二、胭脂红法( Best,1906)
试剂配制:
(1)Best胭脂红贮备液:胭脂红(carmine)2g,碳酸钾1g,氯化钾5g蒸馏水60ml
取三角烧瓶一个,加入上述试剂,用玻棒搅动混合,于水浴中慢慢煮沸至颜色变为深红(约3-5分钟)。冷却后过滤,加入氢氧化铵20毫升,于小口砂塞瓶密封保存于冰箱。
(2)Best胭脂红染液:Best烟脂红贮备液10ml,氢氧化铵15ml,甲醇15ml
(3)Best氏分化液:无水酒精20ml,甲醇10ml,蒸馏水25ml
操作方法:
1、新鲜薄片组织立即固定于Gendre氏或Carnoy氏液。脱水、包埋同前法。
2、切片脱蜡到水。
3、Harris氏苏木素染5-10分钟。
4、水洗。5、1%盐酸酒精分化。
6、流水冲洗5分钟。
7、用Best胭脂红染液染20-30分钟。
8、不用水洗,直接用Best氏分化液浸洗二次,每次1至数秒钟。
9、95%酒精,无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:糖原呈鲜红色,胞核蓝色。




参考文献:
1、王伯沄,李玉松,黄高升,张远强《病理学技术》
2、凌启波《实用病理特殊染色和组化技》
3、刘介眉等《病理组织染色的理论方法和应用》
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